M65® ELISA

Der M65® ELISA bestimmt die Menge an löslichem Keratin 18 (K18, auch Cytokeratin 18, CK18), das von sterbenden Zellen freigesetzt wurde und kann zur Abschätzung der generellen Zelltodrate (aufgrund von Apoptose und Nekrose) bei Epithelzellen eingesetzt werden. Der M65® ELISA ist vornehmlich für den Einsatz zusammen mit dem M30 Apoptosense® ELISA-Assay gedacht, welcher spezifisch die Apoptoserate bestimmt.

Da beide Assays mit der gleichen Referenz kalibriert werden, ermöglicht die Verwendung des M30 Apoptosense® und M65® ELISA die Bestimmung des relativen Anteils von Apoptose an der Gesamtmenge des Tumorzelltodes.

Hintergrund

Tumorzellen sterben in vivo durch Apoptose und Nekrose. Die Art und Weise des Zelltodes hängt ab sowohl von der Art des cytotoxischen Stimulus wie auch von der Art des Tumors. Während eines zellulären ATP-Mangels kann es dazu kommen, dass ein apoptotischer Stimulus das apoptotische Programm nicht startet und die Zellen durch Nekrose sterben (Leist et al., 1997). Während der Nekrose werden intrazelluläre Proteine, die nicht von Kaspasen modifiziert wurden ausgeschleust.

Keratin 18 (K18) ist ein hochexprimiertes intrazelluläres Protein, das in vielen verschiedenen Arten epithelialer Zellen vorkommt. Die meisten K18 Molekülebilden unlösliche Filamente. Eine gewisse Menge an löslichem K18 kann jedoch ebenfalls nachgewisen werden (Chou et al., 1993). Während des Zelltodes wird K18 in den extrazellulären Raum freigesetzt. Die Messung des extrazellulären löslichen K18 ist deshalb ein Hinweis auf epithelialen Zelltod (aufgrund von Apoptose und Nekrose) (Kramer et al., 2004).

K18 wird während der Apoptose von Kaspasen proteolytisch gespalten und Kaspase-gespaltene K18-Fragmente werden von den Zellen ins extrazelluläre Medium abgegeben. Die relative Menge an extrazellulärem Kaspase-gesapaltenem K18 im Vergleich zur Totalmenge an K18 gibt also Aufschluss über die relative Menge an Apoptose im Vergleich zur totalen Zelltodrate (unterschiedliche M30:M65-Verhältnisse) (Kramer et al., 2004).

Der M65® ELISA verwendet zwei unterschiedliche monoklonale anti-K18-Maus-Antikörper vom Typ IgG und ist vornehmlich für die Verwendung zusammen mit dem M30 Apoptosense® Assay zur Beurteilung von Tumorzelltod in humanem Serum gedacht. Der M30 Apoptosense® Assay bestimmt spezifisch ein Neoepitop, das durch Kaspasespaltung von K18 an der Aminosäure Asp396 (K18Asp396-NE, M30 Neo-Epitop) entsteht und spiegelt die Apoptose in epithelialen Zellen wider (Hägg et al. 2002; Bivén et al. 2003). Die beiden Assays wurden gegen das gleiche Standardmaterial kalibriert, um die Berechnung der Verhältnisse zwischen Kaspase-gespaltenem und Total-K18 zu ermöglichen (M30:M65-Verhältnis). Das Induzieren von Apoptose in Zellkulturen führt zu Freisetzung von Kaspase-gespaltenem K18 und zu relativ hohen M30:65-Verhältnissen, wobei das Induzieren von Nekrose zu niedrigen M30:65-Verhältnissen führt, wobei nahezu ausschließlich nicht gespaltene K18-Moleküle freigesetzt werden. Das M30:M65-Verhältnis gibt also Aufschluss über die Art des Zelltodes von epithelialen Zellen. 

M65® ELISA ist CE-zertifiziert

PEVIVAs M65® ELISA ist CE-zertifiziert und als Medizinprodukt für die in vitro-Diagnose zugelassen. Jeder Kit enthält ein mehrsprachiges Instruktionshandbuch.